O Rio Guadiana nasce nas Lagunas de Ruidera, na provincia de Ciudad Real, na Espanha, a uma altitude de aproximadamente 1.700 metros. Desagua no Oceano Atlântico, no Golfo de Cádis, entre Vila Real de Santo António (Portugal) e Ayamonte (Espanha). Seu curso total é de cerca de 830 km, fazendo parte da fronteira entre Portugal e Espanha em trechos ao longo do seu estuário e curso inferior. A bacia hidrográfica, ampla e majoritariamente espanhola, tem área aproximada de 67.000 km². No interior de Portugal, o Guadiana é navegável apenas em parte do seu trajeto, com a Barragem de Alqueva criando o maior lago artificial da Europa.