الثلث الأخير من الليل هو الجزء الأخير من الليل الذي يبدأ بعد تقسيم الوقت بين غروب الشمس وطلوع الفجر إلى ثلاثة أجزاء متساوية. ينتهي الثلث الأخير من الليل عند طلوع الفجر، أي عندما يحل وقت صلاة الفجر المفروضة. بالتالي فإن وقت الثلث الأخير يمتد من بداية هذا الجزء الأخير حتى طلوع الفجر، حيث ينتهي هذا الوقت ويبدأ وقت الفجر الشرعي. لحسابه عمليًا، نقيس الزمن بين غروب الشمس وطلوع الفجر ثم نقسمه إلى ثلاثة أقسام متساوية، فالثلث الأخير يشمل الثلث الأخير من هذه الفترة. على سبيل المثال، إذا بدأ غروب الشمس الساعة 7 مساء وانتهى الفجر الساعة 5 صباحاً (مدة 10 ساعات)، فإن الثلث الأخير يبدأ بعد مرور ساعتين وثلثين (حوالي الساعة 1:20 صباحاً) وينتهي بطلوع الفجر.

إجمالًا، الثلث الأخير من الليل ينتهي مباشرة بطلوع الفجر، وهو الوقت الشرعي لصلاة الفجر، ولا يجوز أداء صلاة الفجر قبل دخول وقتها، أي قبل طلوع الفجر. هذه الفترة من الليل لها فضل خاص في العبادة والدعاء، وهي ساعة ينزل الله فيها إلى السماء الدنيا ويستجيب للدعاء، وفقًا للأحاديث النبوية.