الثلث الأخير من الليل يبدأ بعد تقسيم فترة الليل (الزمن بين غروب الشمس وطلوع الفجر) إلى ثلاثة أجزاء متساوية، ويُعتبر الثلث الأخير هو الجزء الأخير من هذه الأجزاء. مثلاً، إذا كان الليل من المغرب إلى الفجر 12 ساعة، فإن الثلث الأخير يبدأ من الساعة التاسعة مساءً حتى طلوع الفجر. بشكل عام، يبدأ الثلث الأخير من الليل بعد منتصف الليل حتى طلوع الفجر، ويختلف توقيته بحسب طول الليل وقصره حسب المواسم وموقع المكان. كما أن الثلث الأخير من الليل يعتبر وقتًا مباركًا، حيث ينزل الله تعالى إلى السماء الدنيا خلاله ويستجاب فيه الدعاء، وهو وقت مستحب لصلاة قيام الليل والدعاء والعبادة.